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桑葉延年益壽的藥理學(xué)研究

1.1藥物:桑葉為冬桑葉,經(jīng)霜后采摘,制成水提液每毫升含生藥量1.6g,由浙江省處洲制藥廠提供 。1.2動物:NIH小鼠,體重18~22g,♀♂各半;Wistar大鼠由本校實(shí)驗(yàn)動物中心提供 。

桑葉延年益壽的藥理學(xué)研究

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【桑葉延年益壽的藥理學(xué)研究】 黑腹野生型果蠅,從浙江大學(xué)生命科學(xué)院遺傳室引種,繁殖供實(shí)驗(yàn)用 。2方法與結(jié)果2.1抗應(yīng)激作用2.1.1對小鼠耐高溫能力的影響:小鼠ig給藥,每天1次,用藥14d后將小鼠放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),溫度維持在45℃,觀察死亡時間 。結(jié)果桑葉8g/kg組能明顯延長小鼠的耐高溫時間(表1),表明桑葉能提高小鼠的耐熱能力 。表1桑葉對小鼠耐受高溫能力的影響----------------------------------------------------------------------組別劑量(g/kg)n耐高溫時間(min)----------------------------------------------------------------------對照組-1620.11±4.14桑葉21622.35±4.5541620.32±1.8981624.85±5.18**----------------------------------------------------------------------與對照組比較:**P<0.012.1.2對大鼠腎上腺內(nèi)VitC含量的影響:Wister大鼠,體重:♂(326.3±36.1)g,♀(228.5±33.4)g 。設(shè)5組,各組每天1次ig給藥,3周后將大鼠置46℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)30min,取出放血處死,取腎上腺稱重,置勻漿器內(nèi)制成勻漿,按方法實(shí)驗(yàn),在分光光度計(jì)580nm波長記錄吸光度 。根據(jù)VitC標(biāo)準(zhǔn)曲線求各樣品吸光度值所相當(dāng)?shù)哪I上腺內(nèi)VitC含量 。計(jì)算每100g腎上腺所含VitC的mg數(shù) 。結(jié)果見表2,大鼠在高溫刺激下引起腎上腺內(nèi)VitC含量降低,腎上腺內(nèi)VitC含量的降低反映腎上腺皮質(zhì)的分泌功能低下 。桑葉8g/kg能防止高溫引起的腎上腺VitC含量的降低,這表明在應(yīng)激狀況下,桑葉能防止由于應(yīng)激反應(yīng)引起的腎上腺功能低表2桑葉對大鼠腎上腺VitC含量的影響----------------------------------------------------------------------組別劑量n溫度腎上腺VitC含量(g/kg)(℃)(mg/100g腎上腺)----------------------------------------------------------------------對照組-746264.85±53.53###桑葉21046257.60±42.204946270.60±50.908846400.89±147.51*室溫對照組-927454.66±49.47----------------------------------------------------------------------與室溫對照組比:###P<0.001;與對照組比:*P<0.052.1.3對地塞米松引起小鼠“耗竭“現(xiàn)象的影響:取小鼠,桑葉8g/kg組每天1次ig給藥,用藥2周后同時每天im地塞米松15mg/kg,連用7d,將小鼠置45℃培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行高溫刺激試驗(yàn),然后將腎上腺取出稱重 。結(jié)果見表3 。地塞米松對照組的小鼠腎上腺重量比桑葉組低,桑葉組與生理鹽水對照組相近,桑葉組小鼠耐高溫時間延長 。實(shí)驗(yàn)表明,注射地塞米松小鼠,一般狀態(tài)較差、體重、腎上腺重量、抗熱能力均低于生理鹽水對照組,呈現(xiàn)了地塞米松引起的“耗竭“現(xiàn)象,桑葉能減輕這種“耗竭“現(xiàn)象的發(fā)生,對腎上腺衰竭具有保護(hù)作用 。表3桑葉對地塞米松引起小鼠“耗竭“現(xiàn)象的影響-----------------------------------------------------------------------組別腎上腺重量耐高溫時間體重增減數(shù)n(♂)(mg/10g體重)n(♀♂)(min)n(♀♂)(g)-----------------------------------------------------------------------生理鹽水-對照組122.05±0.572318.87±2.87230.38±0.88地塞米松-對照組111.25±0.41###2417.41±1.64#24-1.57±0.96地塞米松-桑葉組182.02±0.38***3419.85±2.85***34-1.31±0.94-----------------------------------------------------------------------與生理鹽水對照組比較:#P<0.05###P<0.001;與地塞米松對照組比較:***P<0.0012.2抗疲勞作用2.2.1對小鼠游泳試驗(yàn)的影響:小鼠每天1次ig,14d后開始實(shí)驗(yàn),室溫(27℃),小鼠尾部加負(fù)荷2.5g/10g,以開始放入水中至死亡的時間為游泳時間 。結(jié)果見表4 。桑葉能延長小鼠游泳時間 。2.2.2對小鼠轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)的影響:各組小鼠每天1次ig,2周后,咖啡因40mg/kg×1次sc,用ZB-Ⅰ型小鼠轉(zhuǎn)棒測試機(jī)(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)療儀器廠),轉(zhuǎn)速8r/min進(jìn)行耐力試驗(yàn) 。將小鼠放置正在轉(zhuǎn)動的轉(zhuǎn)棒上,開始記時,觀察小鼠至放上轉(zhuǎn)棒到從轉(zhuǎn)棒上跌下的時間 。結(jié)果見表5 。桑葉能延長小鼠在轉(zhuǎn)棒上的活動時間,說明桑葉能提高小鼠的耐力 。表5桑葉對小鼠轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)的影響----------------------------------------------------------------------組別劑量(g/kg)n轉(zhuǎn)棒上活動時間(s)----------------------------------------------------------------------對照組-2029.8±21.2桑葉22032.5±32.941933.0±26.281960.4±51.4*咖啡因0.042078.4±54.9***-----------------------------------------------------------------------與對照組比:*P<0.05***P<0.0012.3對老年大鼠SOD和脂褐質(zhì)含量的影響:老年Wistar大鼠,♂,18月齡,體重(503.0±57.8)g,設(shè)對照組(飲水)、桑葉16,3.2g/L組,配好后代水飲,用藥3個月,干飼料同常規(guī)飼喂 。青年大鼠,♂,體重(252.9±23.1)g,3月齡 。取大鼠血測紅細(xì)胞內(nèi)SOD量 。然后,大鼠放血處死,取大腦、脊髓稱重后剪碎放入冰的氯仿-甲醇(1:2)液中,置玻璃勻漿器中制組織勻漿 。勻漿液40℃溫育5min,15009離心10min,上清液在F-4000熒光分光光度計(jì)測定脂褐質(zhì)含量,激發(fā)波長435nm,狹縫10nm,0.1μg/mL(0.1mol/L硫酸配制)喹寧為熒光基準(zhǔn)物質(zhì) 。結(jié)果桑葉16g/L組SOD含量明顯高于老年大鼠對照組,桑葉3.2g/L組與老年大鼠對照組比較無顯著差異,老年大鼠對照組與青年對照組比較無顯著差異,表明桑葉16g/L組能提高老年大鼠紅細(xì)胞內(nèi)SOD量(表6) 。桑葉16g/L組大腦、脊髓中脂褐質(zhì)含量與對照組比較均下降,桑葉3.2g/L組大腦中脂褐質(zhì)含量與對照組比較有降低 。老年大鼠對照組的大腦、脊髓中脂褐質(zhì)含量比青年大鼠對照組顯著增高 。表明桑葉有降低老年大鼠大腦、脊髓組織脂褐質(zhì)作用(表7) 。表6桑葉對老年大鼠紅細(xì)胞內(nèi)SOD含量的影響-----------------------------------------------------------------------組別nSOD(U/g·Hb)-----------------------------------------------------------------------老年大鼠對照組8783.3±42.7桑葉(3.2g/L)5799.2±42.4桑葉(16g/L)6898.9±41.0***青年大鼠對照組7779.1±21.5-----------------------------------------------------------------------與老年大鼠對照組比:***P<0.001表7桑葉對老年大鼠大腦、脊髓組織脂褐質(zhì)含量的影響-----------------------------------------------------------------------組別n脂褐質(zhì)(μg/g組織)大腦脊髓-----------------------------------------------------------------------老年大鼠對照組81.66±0.17##1.32±0.28###桑葉(3.2g/L)51.38±0.27*1.02±0.20桑葉(16g/L)71.34±0.21**1.05±0.15*青年大鼠對照組71.27±0.300.81±0.16-----------------------------------------------------------------------與老年大鼠對照組比:*P<0.05**P<0.01與青年大鼠對照組比:##P<0.01###P<0.0012.4對果蠅壽命的影響:黑腹野生型果蠅,25℃恒溫生化培養(yǎng)箱中飼養(yǎng),基礎(chǔ)培養(yǎng)基:蔗糖13g,瓊脂1.5g加水90mL煮沸待瓊脂熔化,玉米粉17g,酵母粉1.4g加水90mL煮沸,兩者合一加丙酸2mL 。將含有桑葉0.1%的桑葉溶液、含有生曬參0.05%的生曬參水煎劑代替水配培養(yǎng)劑 。成蠅用基礎(chǔ)培養(yǎng)基喂養(yǎng)30d,再給予含有桑葉或生曬參的培養(yǎng)基喂養(yǎng),直至死亡 。桑葉對果蠅壽命的影響見表8,結(jié)果表明桑葉能延長果蠅的壽命 。表8桑葉對果蠅壽命的影響-----------------------------------------------------------------------組別n最高壽最高壽命平均壽命平均壽命命(d)延長(%)(d)延長(%)-----------------------------------------------------------------------對照組♀497551.6±9.6♂517360.2±9.60.05%生曬參♀37772.663.1±9.7***22.3♂458313.766.9±6.1###11.10.1%桑葉♀40761.358.5±10.3**13.4♂47786.865.6±15.99.0-----------------------------------------------------------------------與對照組♂比:###P<0.001與對照組♀比:**P<0.01***P<0.0013討論研究表明桑葉能提高小鼠對高溫刺激的耐受能力和防止由于應(yīng)激刺激引起的大鼠腎上腺皮質(zhì)分泌功能低下,而當(dāng)腎上腺功能低下時,桑葉可使之恢復(fù)正常 。用地塞米松使小鼠產(chǎn)生“耗竭“,桑葉則可減輕此現(xiàn)象的發(fā)生 。桑葉能延長小鼠游泳及轉(zhuǎn)棒時間,具有增強(qiáng)肌體耐力作用 。桑葉能延長果蠅的壽命,能提高老年大鼠紅細(xì)胞內(nèi)SOD含量,從而能有效地清除生物氧化產(chǎn)生的超氧陰離子,并能降低老年大鼠大腦、脊髓組織脂褐質(zhì)含量,表明具有延緩衰老作用 。另有研究表明桑葉無中樞神經(jīng)系統(tǒng)安定作用,對免疫功能無影響,無促進(jìn)生長及性激素樣作用 。在桑葉研究的基礎(chǔ)上,組成以桑葉為主的制劑--東方至寶口服液,由桑葉、桑椹、蠶沙等多味中藥組成,藥理及臨床研究有較好的抗衰保健作用,以清補(bǔ)為其特色,尤宜于中老年人服用,本研究為中老年保健用藥和利用蠶桑藥源開拓了一條新路 。

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