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紫外線輻射的尿刊酸對(duì)T淋巴細(xì)胞分泌IL-10的影響

生活百科尿刊酸

尿刊酸（urocanic acid，uca）存在于哺乳動(dòng)物表皮角質(zhì)層中，在天然情況下以反式（trans-uca）存在，當(dāng)受到一定波長(zhǎng)的中波紫外線照射后，部分異構(gòu)為順式（cis-uca） 。近年來(lái)許多研究表明尿刊酸在紫外線引起的免疫抑制中起著重要作用[1] 。為了進(jìn)一步了解uca對(duì)t淋巴細(xì)胞的作用，我們觀察了cis-uca和trans-uca對(duì)t淋巴細(xì)胞分泌il-10的影響，以進(jìn)一步探討尿刊酸在紫外線引起的免疫抑制中的作用機(jī)

紫外線輻射的尿刊酸對(duì)T淋巴細(xì)胞分泌IL-10的影響

文章插圖

一、材料和方法
1.cis-uca的制備：先制作紫外線輻射時(shí)間對(duì)順式尿刊酸轉(zhuǎn)化率標(biāo)準(zhǔn)曲線[2] 。trans-uca（sigma）按40mg/ml濃度于37℃用二甲基亞砜（dmso，sigma)溶解，用重水（d2o，北京化工廠）稀釋至1mg/ml 。取7份樣品，每份2.5ml置于直徑7cm的平皿中使成薄層 。將平皿置于70μw/cm2，波長(zhǎng)297nm的紫外線（uv）下照射5min、10min、20min，30min，1h，2h，3h，然后用氫譜磁共振（mr）分析順?lè)崔D(zhuǎn)化率，繪制出照射時(shí)間對(duì)順式轉(zhuǎn)化率的曲線 。根據(jù)曲線得知照射1h后順式轉(zhuǎn)化率達(dá)到最高峰為70％ 。據(jù)此我們制備了5mmol/l的cis-uca 。
2.分離淋巴細(xì)胞：正常成人靜脈血，肝素抗凝，用淋巴細(xì)胞分離液分離 。
3.il-10濃度的檢測(cè)：淋巴細(xì)胞按如下分組培養(yǎng)，①淋巴細(xì)胞對(duì)照組，②淋巴細(xì)胞＋pha組，③淋巴細(xì)胞＋cis-uca＋pha組，④淋巴細(xì)胞＋trans-uca＋pha組，其中細(xì)胞數(shù)為1×106/ml，pha濃度為0.05mg/ml，cis-uca和trans-uca組又分為a、b、c、d4組，uca濃度分別采用1.00、0.75、0.50、0.20mmol/l，培養(yǎng)48h后收取上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa，深圳晶美公司試劑盒）定量測(cè)定il-10濃度
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用配對(duì)t檢驗(yàn) 。
二、結(jié)果
1.il-10濃度檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1 。表1結(jié)果表明cis-uca對(duì)t淋巴細(xì)胞分泌il-10有著明顯的抑制作用，這種抑制作用隨著cis-uca濃度的增加而增加 。配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，cis-uca組（t=3.18，p＜0.05）、trans-uca組(t=2.72，p＜0.05)與pha組間差異均有顯著性;cis-uca組與trans-uca組間差異也有顯著性（t=2.91，p%26lt;0.05）;cis-uca組（t=2.53，p＜0.05)、trans-uca組（t=11.13，p＜0.01）、pha組（t=22.66，p＜0.01）與對(duì)照組相比差異均有顯著性 。cis-uca的濃度與il?10濃度之間存在著明顯的相關(guān)性（r=－0.99，tr=9.23，p＜0.01），trans-uca的濃度與il-10濃度之間無(wú)顯著相關(guān)性（r=0.87，tr=2.50，p＞0.05) 。
表1　尿刊酸對(duì)人外周血t淋巴細(xì)胞分泌il-10的影響il-10濃度 。
組別尿刊酸濃度(mmol/l)1.00.750.50.2cis-uca＋pha組109.65251.19316.23512.86trans-uca＋pha組363.08478.63501.19512.86pha組*630.96537.03645.65575.44淋巴細(xì)胞對(duì)照組*87.1079.4395.5089.14 注：表中數(shù)值為il-10濃度，均為elisa復(fù)孔結(jié)果，il-10濃度單位為pg/ml 。*此二組均不加uca
三、討論
為進(jìn)一步了解尿刊酸在紫外線引起的免疫抑制作用中的機(jī)理，我們研究了順式尿刊酸對(duì)pha刺激的外周血t淋巴細(xì)胞分泌il-10的影響 。il-10是由抗原刺激的th2細(xì)胞和b細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子，它的生物學(xué)作用主要是抑制th1細(xì)胞合成il-2、il-3、tnf-β、ifn-γ等細(xì)胞因子，抑制外周血單核細(xì)胞合成gm-csf和ifn-γ，并抑制活化單一核細(xì)胞合成細(xì)胞因子和mhc-ⅱ類抗原的表達(dá) 。il-10還能誘導(dǎo)b細(xì)胞對(duì)mhc-ⅱ類分子的表達(dá)，增強(qiáng)b細(xì)胞活力和促進(jìn)活化b細(xì)胞增殖及免疫球蛋白的分泌 。本研究結(jié)果表明cis-uca較trans?uca更有效地抑制t淋巴細(xì)胞分泌il-10，表明尿刊酸經(jīng)紫外線輻射后異構(gòu)成的cis-uca通過(guò)抑制t淋巴細(xì)胞產(chǎn)生il-10，通過(guò)降低b細(xì)胞對(duì)mhc-ⅱ類分子的表達(dá)，降低b細(xì)胞的活力和增殖，并抑制其免疫球蛋白的分泌，從而抑制b細(xì)胞參與的體液免疫反應(yīng) 。這可能是紫外線抑制機(jī)體體液免疫的一種可能的機(jī)理 。

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)擴(kuò)展閱讀