co2激光作為治療尖銳濕疣的有效手段被廣泛應用，但我們在臨床中發(fā)現(xiàn)少數(shù)患者治療后出現(xiàn)尖銳濕疣復發(fā) 。因此，我們自1997年1～4月收集了co2激光治療尖 銳濕疣的煙霧標本，用pcr方法進行hpv dna的檢測，現(xiàn)報道如下 。
文章插圖
一、材料和方法
(一)標本來源：20例均為具有典型皮損，臨床確診為尖銳濕疣的門診患者 。其分布部位為冠 狀溝、包皮、陰莖、大小陰唇 。
(二)標本的收集和貯存：治療前后用短波紫外線對操作周圍進行照射消毒 。將co2激光調(diào) 至10w左右，激光槍與垂直線呈10°～20°角，使飛濺的煙霧能不受阻擋垂直上升 。同時在疣體上方2cm處，用生理鹽水浸潤的消毒棉簽熏蒸，時間盡可能長，使棉簽呈焦黃色，不可碰觸疣體及激光頭，否則將其刪除 。之后將棉簽放入消毒試管中，-4℃冷藏待測 。
(三)pcr：采用軍事醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所生產(chǎn)的pcr診斷試驗盒，內(nèi)含hpv6、11dna引物，具體步驟如下 。將標本充分溶于0.5ml離心管中，加200μl生理鹽水混勻，8 000r/min離心5分鐘，棄上清液，加50μl裂解液，55℃ 1小時后，100℃煮沸10分鐘，15000 r/min離心10分鐘，取上清液5μl作為hpv dna模板，加入pcr混合物15μl，裂解液0.2μl，石蠟油20μl混合，按下列條件進行pcr擴增 。變性94℃、60秒；退火50℃、60秒；延伸72 ℃、60秒；循環(huán)次數(shù)35次 。取pcr擴增溶液10μl直接上樣于1.5%瓊脂糖凝膠進行電泳，在紫外燈光下觀察有450bp的橙色熒光帶者即為陽性 。同時對試驗盒內(nèi)陰陽性對照標本進行同樣處理 。
【用聚合酶鏈反應檢測CO2激光治療尖銳濕疣煙霧中的HPVDNA】 二、結果
20份煙霧標本中有1份陽性 。并將陽性標本送浙江醫(yī)科大學重復檢測，證實確為陽性 。在pcr 檢測中，試驗盒中對照標本均相應顯示 。
三、討論
carden等［1］證實co2激光煙霧中有存活的hpv 。少量co2 激光煙霧中存在hpv的原因主要有：①疣體突出部分較疏松，大功率co2激光照射時，其 光壓易使疣組織向四周飛濺 。②由于co2激光使組織氣化時，形成微型爆炸，當其發(fā)生在突出的疣體側緣時，易使上端較疏松的疣組織向四周播散 。顧恒等［2］對21例尖銳濕疣co2激光煙塵中的hpv進行pcr測定，均為陰性 。而我們檢測了20例，有1例hpv6、11型dna陽性 。產(chǎn)生兩者差異的原因可能為觀察例數(shù)較少，而出現(xiàn)概 率上的差異 。
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