腎上腺皮質(zhì)激素在治療瘢痕疙瘩中取得了顯著療效 ， 但對其作用機理的看法并不一致 。我們選用確炎舒松a(ta)瘢痕組織內(nèi)注射治療4個月 ， 手術(shù)切取治療前后新鮮瘢痕組織 ， 測定羥脯氨酸含量及ⅰ、ⅲ型膠原蛋白含量 ， 同時觀察其形態(tài)學(xué)變化 ， 以探討ta對瘢痕疙瘩膠原代謝影響的機制 。
文章插圖
一、材料和方法
(一)病例：瘢痕疙瘩患者8例 ， 面頰1例、前胸2例、背1例、耳垂3例、下腹1例；男4例 ， 女4例；年齡27～42歲 ， 平均34.5歲；病程5個月至15年 ， 平均7.8年；正常對照組取自做其他整形手術(shù)時切除的正常皮膚(非瘢痕疙瘩患者) ， 共7例 ， 面頰1例、前胸5例、背1例；男3例 ， 女4例；年齡24～45歲 ， 平均34.5歲 。
(二)主要試劑：
1.ta注射液：選用2％利多卡因作為稀釋液 ， 每次注射時 ， 抽取1ml ta溶液(10mg)與2ml 2％利多卡因(40mg)混勻配制成濃度為20％ ta注射液 。75％酒精消毒皮損后 ， 依次從皮損邊緣處邊進針邊將藥物緩慢注入瘢痕組織內(nèi) ， 直到局部皮膚呈白色 。若3ml藥物用完后仍有未注射的皮損 ， 考慮下次治療 。
2.每例患者每處皮損平均半月治療1次 ， 4次一個療程 ， 共治療2個療程(ta由上海第九制藥廠提供) 。
(三)方法：無菌條件下 ， 切取新鮮皮損組織 ， 去凈周圍結(jié)締組織 ， 進行預(yù)處理 。
1.羥脯氨酸含量測定： 將經(jīng)乙醇脫水、氯仿脫脂的組織置入鹽酸水解 ， 加0.2mol/l氯胺-t氧化 ， 加甲苯 ， 1000r/min離心3分 ， 取水層液煮沸 ， 冷卻 ， 加甲苯振蕩 ， 吸取2ml甲苯層溶液置一干凈試管 ， 加艾氏溶液氧化 ， 溶液將變成不同深度紫紅色 ， 用722紫外分光光度計測a560值 。
2.ⅰ、ⅲ 型可溶性膠原蛋白測定：取出－20℃保存組織用0.5mol/l冰醋酸、胃蛋白酶提取 ， 上清液加nacl溶液(0.9mol/l)鹽析 ， 沉淀置透析袋 ， 用0.05mol/l冰醋酸透析 ， 真空冷凍干燥 ， 稱重 ， 溶于樣品緩沖液 ， －20℃保存 。ⅰ 型膠原蛋白提?。簩⑸锨逡杭尤雗acl溶液(2.6mol/l) ， 離心 ， 收集沉淀 ， 稱重 ， 計算出相對濃度 。ⅲ型膠原蛋白提?。喝、?、ⅲ 型混合物懸浮于nacl溶液(1.7mol/l) ， 0.05mol/l tris緩沖液(ph7.5) ， 離心 ， 沉淀即ⅲ型膠原 ， 稱重 。
【確確炎舒松A炎舒松A對瘢痕疙瘩膠原代謝的影響】 4.組織形態(tài)學(xué)觀察：新鮮組織分別置10％中性福爾馬林液固定24小時和6％戊二醛磷酸緩沖液固定過夜 ， 常規(guī)包埋、染色、切片、光鏡及透射電鏡觀察 。
二、結(jié)果
1.取10μg/ml l-4-羥脯氨酸標準溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml ， 按上述方法測得a560值分別為：0.039、0.289、0.339、0.66 。求得直線回歸方程：y=－0.052±0.096x ， y：a值 ， x：羥脯氨酸含量(μg) 。
2.ta治療前羥脯氨酸含量為13.61±2.4μg(±s ， 下同) ， 對照組5.2±1.97μg ， 兩組經(jīng)t檢驗 ， t=7.34 ， p＜ 0.01 ， 說明瘢痕疙瘩組織羥脯氨酸含量明顯增高；治療后為6.31±2.4μg ， 與治療前相比 ， t=5.88 ， p＜ 0.01；與對照組相比 ， t=0.95 ， p ＞0.05 ， 說明經(jīng)一個療程治療 ， 羥脯氨酸含量降低 。
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